Přípravná fáze: V tomto počátečním stádiu je 6-uhlíková molekula cukru (obvykle glukóza) fosforylována dvakrát za vzniku fruktóza-1,6-bisfosfátu. Tento proces vyžaduje vstup 2 molekul ATP a využívá enzymy hexokinázu a fosfofruktokinázu.
Fáze štěpení: Během této fáze se fruktóza-1,6-bisfosfát štěpí na dva 3-uhlíkové cukry:glyceraldehyd-3-fosfát (GAP) a dihydroxyacetonfosfát (DHAP). Tyto 2 molekuly jsou vzájemně konvertibilní a obě mohou postupovat dále v dráze.
Fáze výplaty: Tato konečná fáze zahrnuje přeměnu GAP a DHAP na pyruvát, přičemž v procesu vznikají ATP a NADH. Tato fáze se skládá z několika enzymatických kroků, včetně fosforylace na úrovni substrátu a oxidačních reakcí. Nakonec jsou produkovány 2 molekuly pyruvátu spolu s celkem 4 molekulami ATP a 2 molekulami NADH na každou molekulu glukózy, která vstupuje do glykolýzy.